犬腺狀病毒滅活檢測(cè)
犬腺病毒(Canine adenovirus，CAV)分為CAV-I和CAV-Ⅱ。CAV-I引起犬的傳染性肝炎，CAV-Ⅱ則引起犬的傳染性喉氣管和腸炎。各個(gè)年齡段的狗都有可能被感染，但幼犬最易感，死亡率較高。最重要的傳染源是病犬和康復(fù)犬，它們從尿液、糞便、呼吸道分泌物和唾液中向外界排毒。其他犬類(lèi)可通過(guò)接觸病犬和病毒感染性物質(zhì)感染，主要感染途徑為消化道和呼吸道。懷孕的狗可以通過(guò)胎盤(pán)感染胎兒，并導(dǎo)致新的小狗死亡，潛伏期左右各7天。大多數(shù)幼犬是急性的，1- 2天后死亡。成年狗傾向于在7天內(nèi)康復(fù)，沒(méi)有并發(fā)癥。 咨詢電話: 13816144967 (微信同號(hào))
狂犬病病毒糖/核等結(jié)構(gòu)蛋白的重組CAVⅡ型病毒的免疫原性
1．在 MDCK細(xì)胞上大量制備狂犬病病毒糖/核等結(jié)構(gòu)蛋白的重組犬Ⅱ型腺病毒，測(cè)定TCIDso。以無(wú)免疫史的家犬為受試動(dòng)物，每條犬肌肉注射0.2ml TCIDs.為10°的重組病毒;同時(shí)以犬Ⅱ型腺病毒疫苗株免疫犬作為對(duì)照組。
2．免疫后1周開(kāi)始每隔1周采集和分離免疫犬及對(duì)照犬血清一次。
3．采用間接ELISA方法，即以純化的狂犬病病毒作為抗原包被酶標(biāo)板，待檢免疫犬血清與之反應(yīng)，再以辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗犬二抗結(jié)合并顯色。結(jié)果表明，重組病毒免疫后狂犬病病毒（糖/核等結(jié)構(gòu)蛋白）特異性抗體顯著升高。
4．采集核蛋白重組苗免疫后4周犬的抗凝血液，按2×0.1ml分裝入2個(gè)離心管中，加入紅細(xì)胞裂解液，感作后離心，沉淀用0.2mlPBS 懸浮，將FITC標(biāo)記的羊抗犬CD4+和 CD8+抗血清分別與PBS懸浮的白細(xì)胞4℃感作1h，經(jīng) PBS洗滌⒉次后懸浮進(jìn)行FACS檢測(cè)。結(jié)果表明,免疫犬CD4+數(shù)量較對(duì)照組顯著增高，CD4+/CD8+比值顯著增加。說(shuō)明，重組苗中核蛋白誘導(dǎo)了水平較高的細(xì)胞免疫。
狂犬病病毒糖/核等結(jié)構(gòu)蛋白的重組CAV-Ⅱ型病毒誘導(dǎo)產(chǎn)生抗體的中和試驗(yàn)作用及免疫保護(hù)作用
取前一試驗(yàn)中對(duì)照組及免疫組犬血清各100 u l,各與35 LDa狂犬病強(qiáng)毒CVS細(xì)胞毒混合，室溫孵育3h后，后肢皮下注射BALB/c乳鼠各40只，每只10ul，觀察4周。結(jié)果顯示，與對(duì)照組犬血清共孵育的CVS造成全部40只乳鼠發(fā)病死亡，而重組病毒免疫犬血清孵育組無(wú)發(fā)病致死。說(shuō)明該重組CAV-Ⅱ誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生的糖/核等結(jié)構(gòu)蛋白抗體具有顯著的中和作用。
從以上結(jié)果可以得出，本發(fā)明的積極效果在于重組病毒是通過(guò)將攜帶狂犬病病毒糖/核等結(jié)構(gòu)蛋白表達(dá)盒的重組全基因組 DNA 序列轉(zhuǎn)染犬Ⅱ型腺病毒E3區(qū)易感細(xì)胞（即MDCK 細(xì)胞系）中獲得的。其無(wú)需進(jìn)行大量復(fù)雜的病毒分離、鑒定和純化工作。同時(shí)本重組疫苗除了具有犬Ⅱ型腺病毒的生物學(xué)和免疫學(xué)特征以外，還展現(xiàn)了狂犬病病毒糖蛋白或核蛋白的免疫學(xué)特性，即除了可刺激機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)犬腺病毒的免疫力以外，還可產(chǎn)生針對(duì)狂犬病病毒的免疫力，實(shí)現(xiàn)了外源基因的持續(xù)穩(wěn)定表達(dá)。咨詢電話: 13816144967 (微信同號(hào))
