腸道病毒滅活檢測(cè)

腸道病毒是一大類病毒的總稱，它們的共同特點(diǎn)是通過消化道感染和傳播，主要包括脊髓灰質(zhì)炎病毒，柯薩奇病毒、?？刹《竞托滦湍c道病毒。咨詢電話: 13816144967 (微信同號(hào))

腸道病毒具有傳染性，人腸道病毒主要通過消化道感染人體，主要引起神經(jīng)系統(tǒng)疾病、口咽和呼吸道疾病、心血管疾病和眼病等，嚴(yán)重者可危及生命。有趣的是，腸道病毒很少引起胃腸道疾病，它們主要引起的是腸道外疾病，最常見的疾病包括脊髓灰質(zhì)炎(也稱為小兒麻痹癥)、無菌性腦膜炎、手足口病和心肌炎等。

腸道病毒EV71感染是人腸道病毒的一種，簡(jiǎn)稱為EV71，常引起兒童手足口病、病毒性咽峽炎，重癥患兒可出現(xiàn)心肌炎、肺水腫、腦炎等，統(tǒng)稱為腸道病毒EV71感染疾病。該病多發(fā)生于兒童，尤其是3歲以下嬰幼兒多發(fā)，少數(shù)病情較重，嚴(yán)重的會(huì)引起死亡。

V71滅活疫苗（人二倍體細(xì)胞）滅活工藝驗(yàn)證

目的：

對(duì)腸道病毒71型（enterovirus 71,EV71）滅活疫苗（人二倍體細(xì)胞）的滅活工藝進(jìn)行驗(yàn)證。咨詢電話: 13816144967 (微信同號(hào))

方法：

取3批次經(jīng)甲醛滅活的EV71滅活病毒收獲液樣品,分別連續(xù)盲傳4代,并設(shè)病毒對(duì)照盲傳4代。觀察每代次樣品的細(xì)胞病變情況,采用微量滴定法檢測(cè)病毒感染性滴度,ELISA法檢測(cè)EV71特異抗原含量,實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)病毒核酸水平及病毒負(fù)鏈產(chǎn)生情況。

結(jié)果：

3批滅活的疫苗病毒收獲液樣品經(jīng)4次盲傳后,各代次均未出現(xiàn)明顯的細(xì)胞病變,經(jīng)微量滴定法均未檢測(cè)到EV71感染性滴度。滅活的病毒收獲液盲傳至第2代時(shí),病毒負(fù)鏈檢測(cè)已為陰性;至第3代時(shí),EV71抗原檢測(cè)為陰性;至第4代時(shí),病毒核酸檢測(cè)為陰性。病毒對(duì)照經(jīng)盲傳4代后,各代次均出現(xiàn)明顯細(xì)胞病變;自第2代開始,感染性滴度維持在106~107 CCID50/ml,抗原含量為200~370 U/ml,且均可檢測(cè)出明顯的病毒核酸及病毒負(fù)鏈增殖。

結(jié)論通過經(jīng)典的＂細(xì)胞上盲傳3代＂的檢測(cè)方法,并結(jié)合實(shí)時(shí)定量RT-PCR對(duì)病毒核酸和負(fù)鏈進(jìn)行檢測(cè),證實(shí)經(jīng)甲醛滅活的EV71滅活疫苗樣品已完全滅活。

EV71 滅活疫苗具有良好的免疫原性

接種EV71滅活疫苗可刺激機(jī)體產(chǎn)生抗EV71的免疫力，用于預(yù)防EV71感染所致的 手足口病。EV71滅活疫苗接種后28天，血清抗體陽轉(zhuǎn)率為88.1%～100%。目前關(guān)于EV71疫苗免疫持久性研究數(shù)據(jù)有限，根據(jù)對(duì)Ⅲ期臨床研究對(duì)象的跟蹤觀察，接種后56天至8個(gè)月，EV71中和抗體滴度有所下降，8～14個(gè)月抗體水平處于相對(duì)穩(wěn)定狀態(tài)，但抗體陽性率未見下降。免疫后兩年的觀察結(jié)果顯示，中和抗體水平和臨床保護(hù)效力仍然維持在較高水平。接種2劑次EV71滅活疫苗對(duì)于EV71感染相關(guān) 手足口病的保護(hù)效力為90%～97.45%，對(duì)于EV71引起的相關(guān)疾病的保護(hù)效力為80.4%～88.0%。對(duì)柯薩奇病毒A16型（CV A16）和其他腸道病毒感染 手足口病無保護(hù)效力。不同基因型毒株的免疫原性研究結(jié)果顯示，疫苗株對(duì)EV71不同基因型和亞型具有交叉保護(hù)作用。咨詢電話: 13816144967 (微信同號(hào))